Hologic Progensa PCA3 Assay Návod na používanie

Značka: Hologic

Model: Progensa PCA3 Assay

Typ: Návod na používanie

Progensa PCA3

Test Progensa PCA3

Test Progensa PCA3 1

501377CS Rev. 003

Pouze pro diagnostické použití in vitro.

Pouze pro export z USA.

Všeobecné informace . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2

Určené použití . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2

Souhrn a vysvětlení testu . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2

Principy metody . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2

Dodávané materiály a reagencie . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 4

Materiály . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 8

Varování a bezpečnostní opatření . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 10

Požadavky na uchovávání a manipulaci . . . . . . . . . . . . . . . . . . 12

Sběr, transport a uchovávání vzorku . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 13

Postup testu . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 15

Poznámky k postupu . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 21

Postupy kontroly kvality . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 24

Interpretace výsledků . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 25

Omezení . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 30

Funkční charakteristiky . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 31

Literatura . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 36

Test Progensa PCA3 2

501377CS Rev. 003

Všeobecné informace Progensa PCA3

Všeobecné informace

Určené použití

Test Progensa PCA3 je amplifikační test nukleové kyseliny (NAAT) in vitro, který detekuje

ribonukleovou kyselinu (RNA) genu č. 3 karcinomu prostaty (Prostate Cancer Gene 3, PCA3)

ve vzorcích mužské moči a generuje skóre PCA3. Skóre PCA3 je určeno pro použití ve

spojení se standardizovaným diagnostickým algoritmem jako pomůcka pro diagnózu

karcinomu prostaty.

Souhrn a vysvětlení testu

Použití testování prostatického specifického antigenu (PSA) v séru při skríningu karcinomu

prostaty vedlo k bioptické diagnóze menších a dříve nedetekovaných nádorů (1), čímž

vzniklo nové diagnostické dilema: pouze část mužů se zvýšenými hladinami PSA v séru mají

detekovatelný karcinom prostaty. Muži s minimálně jednou negativní biopsií mají často trvale

zvýšenou hladinu PSA v séru primárně v důsledku zvětšené prostaty a benigní hyperplazie

prostaty (BPH). Ovšem významný podíl mužů s mírně zvýšeným sérovým PSA (2,5-4,0 µg/l)

má, nebo se u nich vyvine, klinicky významný karcinom prostaty (1). Zatímco biopsie zůstává

při detekci karcinomu prostaty zlatým standardem, jsou pro snazší rozhodování o provedení

biopsie prostaty nutné přesnější testy s lepší specificitou.

PCA3 (také známé jaké „PCA3DD3“ nebo „DD3PCA3“) je nekódující prostatická specifická RNA,

která je ve vysoké míře exprimována v buňkách karcinomu prostaty, se střední 66násobnou

up-regulací ve srovnání s okolní benigní tkání (2). Exprese genu PSA je naopak podobná v

nádorových i benigních buňkách prostaty. Hladiny PSA RNA mohou být proto použity pro

normalizaci množství prostatické specifické ribonukleové kyseliny (RNA) ve vzorcích pro

molekulární testy. Byla prokázána vhodnost kvantitativního molekulárního testování

založeného na PCA3 z močových sedimentů (2) a z plné moči (3).

Test Progensa PCA3 využívá plnou moč odebranou po vyšetření per rectum (PR), které

zahrnuje tři zmáčknutí každého laloku prostaty. Vyšetření per rectum způsobí uvolnění buněk

prostaty přes prostatické kanálky do močových cest, kde mohou být odebrány v první porci

moči. Moč je zpracovávána přidáním média pro přepravu moči (UTM), které způsobuje lýzu

buněk a stabilizuje RNA. Je provedena kvantifikace PCA3 RNA a PSA RNA a na základě

poměru PCA3 RNA/PSA RNA je stanoveno skóre PCA3. Kromě normalizace signálu PCA3

slouží měření PSA RNA také k potvrzení, že zisk prostatické specifické RNA je dostačující

pro generaci platných výsledků. Vyšší skóre PCA3 koreluje s vyšší pravděpodobností

pozitivní biopsie prostaty.

Principy metody

Test Progensa PCA3 je tvořen dvěma kvantitativními amplifikačními testy nukleové kyseliny.

Test Progensa PCA3 kombinuje následující technologie: technologii zachycení cíle za účelem

zdokonalení zpracování vzorků moči, technologii transkripčně mediované amplifikace (TMA)

za účelem amplifikace clové RNA a technologii hybridizačně protekčního testu (HPA) za

účelem detekce amplikonu.

Je-li test Progensa PCA3 prováděn v laboratoři, jsou molekuly cílové RNA izolovány ze

vzorků moči pomocí metody zachycení cíle. Oligonukleotidy („zachycené oligonukleotidy“),

které jsou komplementární pro sekvenčně specifické cílové regiony, jsou ve vzorku moči

hybridizovány pro cíle. Pro každý cíl se používá samostatný zachycený oligonukleotid.

Progensa PCA3 Všeobecné informace

Test Progensa PCA3 3

501377CS Rev. 003

Hybridizovaný cíl je poté zachycen na magnetické mikročástice, které jsou separovány ze

vzorku moči v magnetickém poli. Promývací kroky se používají pro odstranění cizorodých

komponent z reakční zkumavky. Magnetická separace a promývací kroky se provádí pomocí

systému zachycení cíle.

Amplifikace cíle probíhá pomocí TMA, což je amplifikační metoda nukleové kyseliny založená

na transkripci, která využívá dva enzymy, reverzní transkriptázu Moloneyho viru myší

leukemie (MMLV) a polymerázu T7 RNA. Pro každý cíl se používá unikátní sada primerů.

Reverzní transkriptáza se používá k vytvoření kopie deoxyribonukleové kyseliny (DNA)

(obsahující promoční sekvenci pro polymerázu T7 RNA) cílové sekvence. Polymeráza T7

RNA produkuje více kopií RNA amplikonu z kopie DNA templátu.

Detekce je dosažena pomocí HPA využívající jednořetězcové chemiluminiscenčně značené

sondy nukleové kyseliny, které jsou komplementární k amplikonu. Samostatné sondy se

používají pro každý cílový amplikon. Značené sondy nukleové kyseliny hybridizují specificky

s amplikonem. Selekční reagencie rozlišuje mezi hybridizovanými a nehybridizovanými

sondami inaktivací značení na nehybridizovaných sondách. Během detekčního kroku je

chemiluminiscenční signál produkovaný hybridizovanou sondou měřen pomocí luminometru a

je hlášen jako relativní světelné jednotky (RLU).

PCA3 RNA a PSA RNA jsou kvantifikovány v samostatných zkumavkách a je stanoveno

skóre PCA3. Kalibrátory obsahující známé množství PCA3 RNA nebo PSA RNA transkriptu

jsou obsaženy v každém cyklu testu a používají se k vytvoření standardní křivky. PCA3 a

PSA kontroly jsou obsaženy také k verifikaci přesnosti výsledků interpolovaných ze

standardní křivky.

Test Progensa PCA3 4

501377CS Rev. 003

Dodávané materiály a reagencie Progensa PCA3

Dodávané materiály a reagencie

Poznámka: Informace o H-větách a P-větách, které mohou být spojeny s reagenciemi,

naleznete v knihovně bezpečnostních listů (Safety Data Sheet Library) na adrese

www.hologic.com/sds.

Níže jsou uvedeny reagencie a materiály dodávané pro soupravu testu Progensa PCA3/PSA

k použití při testu Progensa PCA3. Vedle názvu reagencie jsou také uvedeny identifikační

symboly reagencie.

Souprava testu Progensa PCA3, 2 x 100 reakcí, kat. č. 302355 (8 krabic)

Souprava Progensa PCA3, 100 reakcí

Chladicí krabice Progensa PCA3 — uchovávejte při teplotě 2C až 8C od příjmu až do

doby použitelnosti označené na štítku

Krabice s pokojovou teplotou Progensa PCA3 — uchovávejte při teplotě 15C až 30 C od

příjmu až do doby použitelnosti označené na štítku

Symbol Složka Množství

APCA3 amplifikační reagencie

Neinfekční nukleové kyseliny vysušené v pufrovaném roztoku HEPES

obsahujícím <10 % objemového činidla.

1 lahvička

E Enzymatická reagencie PCA3/PSA

Reverzní transkriptáza a RNA polymeráza vysušená v pufrovaném

roztoku HEPES obsahujícím <10 % objemového činidla.

1 lahvička

P Reagencie sondy PCA3

Neinfekční chemiluminiscenční DNA sondy vysušené v sukcinátem

pufrovaném roztoku obsahujícím <5 % objemového činidla a <5 %

lithium lauryl sulfátu.

1 lahvička

Symbol Složka Množství

AR PCA3 amplifikačně rekonstituční roztok

Vodný roztok obsahující konzervační látky (<1 % parabenů).

1 x 9,3 ml

ER PCA3/PSA enzymatický rekonstituční roztok

Pufrovaný roztok HEPES obsahující surfaktant (10 % Triton X-100) a

20 % glycerol.

1 x 3,3 ml

PR PCA3/PSA rekonstituční roztok sondy

Sukcinátem pufrovaný roztok obsahující <5 % lithium lauryl sulfátu.

1 x 12,4 ml

S PCA3/PSA selekční reagencie

Borátem pufrovaný roztok obsahující surfaktant (1 % Triton X-100).

1 x 31 ml

TCR PCA3 reagencie zachycující cíl

Neinfekční nukleová kyselina v pufrovaném roztoku HEPES obsahující

pevnou fázi.

1 x 22 ml

Uzavírací karty 1 balení

Rekonstituční objímky 1 balení

Progensa PCA3 Dodávané materiály a reagencie

Test Progensa PCA3 5

501377CS Rev. 003

Souprava kalibrátoru a kontrol Progensa PCA3 — uchovávejte při teplotě 2 C až 8C od

příjmu až do doby použitelnosti označené na štítku

Souprava Progensa PSA, 100 reakcí

Chladicí krabice Progensa PSA — uchovávejte při teplotě 2 °C až 8 °C od příjmu až do

doby použitelnosti označené na štítku

Symbol Složka Množství

CAL PCA3 kalibrátor 1

Fosfátem pufrovaný roztok obsahující < 5 % lithium lauryl sulfátu.

1 x 2,0 ml

CAL PCA3 kalibrátory 2-5

Neinfekční PCA3 nukleová kyselina ve fosfátem pufrovaném roztoku

obsahujícím <5 % lithium lauryl sulfátu.

4 x 1,7 ml

PC PCA3 pozitivní kontroly

Neinfekční PCA3 nukleová kyselina ve fosfátem pufrovaném roztoku

obsahujícím <5 % lithium lauryl sulfátu.

2 x 1,7 ml

Informační list koncentrací PCA3 1 list

Symbol Složka Množství

A PSA amplifikační reagencie

Neinfekční nukleové kyseliny vysušené v pufrovaném roztoku HEPES

obsahujícím <10 % objemového činidla.

1 lahvička

E Enzymatická reagencie PCA3/PSA

Reverzní transkriptáza a RNA polymeráza vysušená v pufrovaném

roztoku HEPES obsahujícím <10 % objemového činidla.

1 lahvička

P Reagencie sondy PSA

Neinfekční chemiluminiscenční DNA sondy vysušené v sukcinátem

pufrovaném roztoku obsahujícím <5 % objemového činidla a <5 %

lithium lauryl sulfátu.

1 lahvička

Test Progensa PCA3 6

501377CS Rev. 003

Dodávané materiály a reagencie Progensa PCA3

Krabice s pokojovou teplotou Progensa PSA — uchovávejte při teplotě 15 °C až 30 °C od

příjmu až do doby použitelnosti označené na štítku

Souprava kalibrátoru a kontrol Progensa PSA — uchovávejte při teplotě 2 °C až 8 °C od

příjmu až do doby použitelnosti označené na štítku

Symbol Složka Množství

AR PSA amplifikačně rekonstituční roztok

Vodný roztok obsahující konzervační látky (<1 % parabenů).

1 x 9,3 ml

ER PCA3/PSA enzymatický rekonstituční roztok

Pufrovaný roztok HEPES obsahující surfaktant (10 % Triton X-100) a

20 % glycerol.

1 x 3,3 ml

PR PCA3/PSA rekonstituční roztok sondy

Sukcinátem pufrovaný roztok obsahující <5 % lithium lauryl sulfátu.

1 x 12,4 ml

S PCA3/PSA selekční reagencie

Borátem pufrovaný roztok obsahující surfaktant (1 % Triton X-100).

1 x 31 ml

TCR PSA reagencie zachycující cíl

Neinfekční nukleová kyselina v pufrovaném roztoku HEPES obsahující

pevnou fázi.

1 x 22 ml

Uzavírací karty 1 balení

Rekonstituční objímky 1 balení

Symbol Složka Množství

CAL PSA kalibrátor 1

Fosfátem pufrovaný roztok obsahující < 5 % lithium lauryl sulfátu.

1 x 2,0 ml

CAL PSA kalibrátory 2-5

Neinfekční PSA nukleová kyselina ve fosfátem pufrovaném roztoku

obsahujícím <5 % lithium lauryl sulfátu.

4 x 1,7 ml

PC PSA pozitivní kontroly

Neinfekční PSA nukleová kyselina ve fosfátem pufrovaném roztoku

obsahujícím <5 % lithium lauryl sulfátu.

2 x 1,7 ml

Informační list koncentrací PSA 1 list

Progensa PCA3 Dodávané materiály a reagencie

Test Progensa PCA3 7

501377CS Rev. 003

Kapaliny testu Aptima — uchovávání při teplotě 15 °C až 30 °C (2 krabice) od příjmu až do

doby použitelnosti označené na štítku

Poznámka: Veškeré materiály, které jsou součástí soupravy testu Progensa PCA3, je

možné zakoupit také samostatně (viz kapitola Materiály, kde jsou uvedeny podrobnosti).

Symbol Složka Množství

W Promývací roztok

Pufrovaný roztok HEPES obsahující <2 % dodecyl sulfátu sodného.

1 x 402 ml

DF Pufr pro deaktivační kapalinu

Bikarbonátový pufrovaný roztok.

1 x 402 ml

O Olejová reagencie

Silikonový olej.

1 x 24,6 ml

Test Progensa PCA3 8

501377CS Rev. 003

Materiály Progensa PCA3

Materiály

Poznámka: Informace o H-větách a P-větách, které mohou být spojeny s reagenciemi,

naleznete v knihovně bezpečnostních listů (Safety Data Sheet Library) na adrese

www.hologic.com/sds.

Poznámka: Materiály dostupné od společnosti Hologic mají uvedená katalogová čísla.

Potřebný materiál, který se dodává zvlášť

Volitelné materiály

Kat. č.

Přepravní souprava pro vzorky moči Progensa PCA3 302352

Luminometr Leader HC+ 104747

Systém zachycení cíle Hologic (Hologic Target Capture System - TCS) 104555

Souprava Aptima Auto Detect 301048

2 opakovací pipetory eppendorf Repeater Plus 105725

Špičky pro opakovací pipetory (2,5 ml, 5,0 ml a 25,0 ml) —

Buď:

2 vícezkumavkové vířivé mixéry 102160F

3 cirkulační vodní lázně104586F

(62 °C ± 1 °C, 42 °C ± 1 °C, 62 °C ± 1 °C)

3 distanční vložky pro vodní lázeň104627

NEBO

2 lázně/vířivky se suchým teplem SB100 105524F

Mohou být nutné další přístroje SB100 v závislosti na požadovaném výkonu

throughput

—

Mikropipetor, 1000 µl RAININ PR1000 901715

Špičky, 1000 µl P1000 105049

Pipetor, eppendorf 20 až 200 µl 105726

Špičky, pipeta 20 až 200 µl —

Bělidlo, 5% až 7% (0,7 M až 1,0 M) roztok chlornanu sodného —

Plastový kontejner s velkým uzávěrem —

Standardní kontejnery na sběr moči, bez konzervačních látek —

Jednotky deseti zkumavek (Ten Tube Unit - TTU) TU0022

Kazety s deseti špičkami (Ten Tip Cassette - TTC) 104578

Kalibrační standard SysCheck 301078

Kat. č.

Souprava Progensa PCA3, 100 reakcí 302354

Souprava Progensa PSA, 100 reakcí 302357

Souprava kalibrátorů a kontrol Progensa PCA3 302353

Progensa PCA3 Materiály

Test Progensa PCA3 9

501377CS Rev. 003

Souprava kalibrátorů a kontrol Progensa PSA 302356

Technické panely Progensa PCA3/PSA 302350

Souprava pro ředění vzorku Progensa PCA3 302351

Souprava kapalin pro test Aptima 302002C

Jednorázové pipetové špičky s filtrem (1 ml) 10612513 (Tecan)

TECAN Freedom EVO 100/4 900932

Souprava PCA3 Deck Plate, DTS 800 902021

Nádržka na reagencie (40 ml čtvrtkový modul) 104765

Rozdělená nádržka na reagencie (19 ml x 2čtvrtkový modul) 901172

—

Transportní zkumavky 302521

Náhradní propichovací uzávěry 302520

Náhradní nepropichovací uzávěry 103036A

Kat. č.

Test Progensa PCA3 10

501377CS Rev. 003

Varování a bezpečnostní opatření Progensa PCA3

Varování a bezpečnostní opatření

A. Pouze pro diagnostické použití in vitro.

B. Pouze pro export z USA.

Související s laboratoří

C. Používejte pouze dodávané nebo specifikované jednorázové laboratorní materiály.

D. Používejte rutinní laboratorní bezpečnostní opatření. V určených pracovních prostorech

nejezte, nepijte ani nekuřte. Při manipulaci se vzorky moči a reagenciemi soupravy

používejte jednorázové rukavice bez talku, ochranu očí a laboratorní pláště. Po

manipulaci se vzorky moči a reagenciemi soupravy si důkladně umyjte ruce.

E. Varování: Dráždivé, žíravina. Zamezte styku reagencií Auto Detect 1 a Auto Detect 2 s

kůží, očima a sliznicemi. Pokud se tyto kapaliny dostanou do styku s kůží nebo očima,

omyjte postiženou oblast vodou. Pokud dojde k vylití kapalin, rozřeďte je vodou předtím,

než je vytřete do sucha.

F. Pracovní povrchy, pipetory a jiné vybavení musí být pravidelně dekontaminovány pomocí

2,5% až 3,5% (0,35 M až 0,5 M) chlornanu sodného (roztok bělidla) (viz Poznámky k

postupu).

G. Důrazně se doporučuje použití samostatné poamplifikační oblasti, aby se minimalizovala

kontaminace amplikonu v testu. Tato vyhrazená oblast by měla být mimo preamplifikační

oblast, kde probíhá příprava reagencie, zachycení cíle a amplifikace.

H. Chcete-li zabránit kontaminaci laboratorní oblasti amplikonem, měla by být laboratorní

oblast zorganizována v jednosměrném pracovním toku od přípravy reagencie do

poamplifikační oblasti. Vzorky, zařízení a reagencie se nesmí vracet do oblasti, kde byl

proveden předchozí krok. Personál by se neměl pohybovat zpět do předchozí pracovní

oblasti bez řádného zabránění kontaminaci.

Související s vzorkem

I. Po přidání moči musí být na začátku hladina kapaliny v transportní zkumavce pro vzorek

moči mezi dvěma černými indikátorovými linkami na štítku zkumavky. Jinak musí být

vzorky odmítnuty.

J. Při přepravě vzorků dodržujte správné podmínky uchovávání, aby byla zajištěna integrita

vzorku. Stabilita vzorku nebyla hodnocena za jiných přepravních podmínek než těch,

které jsou doporučeny.

K. Data použitelnosti uvedená na sběrné soupravě se vztahují na místo sběru a nikoliv na

testovací zařízení. Vzorky odebrané kdykoliv před datem použitelnosti sběrné soupravy a

přenášené a uchovávané v souladu s příbalovou informací, jsou platné pro testování,

dokonce i v případě, že uplynula doba použitelnosti sběrné zkumavky.

L. Uchovávejte všechny vzorky při specifikovaných teplotách. Provádění testu může být

ovlivněno použitím nesprávně uchovávaných vzorků. Viz Sběr, transport a uchovávání

vzorku, kde jsou uvedeny specifické pokyny.

Progensa PCA3 Varování a bezpečnostní opatření

Test Progensa PCA3 11

501377CS Rev. 003

M. Vzorky moči mohou být infekční. Při provádění tohoto testu dodržujte univerzální

bezpečnostní opatření. Metody správné manipulace a likvidace musí stanovit ředitel

laboratoře. Tento postup by měl provádět pouze adekvátně kvalifikovaný personál,

který je vyškolený v použití testu Progensa PCA3 a adekvátně vyškolený v zacházení

s infekčními materiály.

N. Během manipulace s vzorkem zamezte zkřížené kontaminaci. Vzorky moči mohou

obsahovat vysoké hladiny cílové RNA. Ujistěte se, že nejsou nádoby na vzorky ve

vzájemném kontaktu a použité materiály vyhoďte, aniž byste je přenášeli nad

otevřenými nádobami. Pokud dojde ke kontaktu rukavic se vzorkem moči, vyměňte je,

abyste zabránili zkřížené kontaminaci.

Související s testem

O. Nepoužívejte tuto soupravu po uplynutí doby použitelnosti.

P. U soupravy testu Progensa PCA3 nezaměňujte, nemíchejte ani nekombinujte

reagencie testu PCA3 různých čísel šarží (tj. pro každý analyt musí být reagencie

testu pocházející z chlazené krabice a z krabice s pokojovou teplotou ze stejné šarže).

Reagencie testu lze používat s různými šaržemi kalibračních a kontrolních souprav.

Soupravy kapalin pro test Aptima jsou zaměnitelné. U souprav reagencií PCA3 a PSA

není nutná vzájemná shoda.

Q. Uchovávejte všechny reagencie testu při uvedených teplotách. Provádění testu může

být ovlivněno použitím nesprávně uchovávaných činidel testu. Viz Požadavky na

uchovávání a manipulaci a Poznámky k postupu, kde jsou uvedeny specifické pokyny.

R. Pro deaktivaci testu (viz Postup testu) musí být koncentrace chlornanu sodného

minimálně 2,5 % (0,35 M) po zředění 1:1 s deaktivačním pufrem. Proto musí být

výchozí roztok chlornanu sodného 5% až 7% (0,7 M až 1,0 M), aby se dosáhlo

konečné koncentrace nutné pro deaktivaci.

S. Je nutné použít špičky s hydrofobními zátkami. Minimálně dva opakovací pipetory

musí být určeny pro použití s tímto testem: jeden pro použití v preamplifikačních

krocích a jeden pro použití v poamplifikačních krocích. Jeden mikropipetor musí být

vyhrazen výhradně pro použití při přenosu vzorku, pokud není použit přístroj TECAN

Freedom EVO 100/4. Všechny pipetory se musí pravidelně čistit podle návodu v části

Poznámky k postupu.

T. Při použití opakovacích pipetorů pro přidání reagencie se špičkou pipetoru nedotýkejte

reakční zkumavky, abyste zabránili přenosu z jedné zkumavky do druhé.

U. Adekvátní míchání je nutné pro dosažení přesných výsledků testu. Úplné podrobnosti

naleznete v Poznámky k postupu.

V. Pro preamplifikační, amplifikační a poamplifikační kroky testu musí být vyhrazeny

samostatné vodní lázně.

W. Některé reagencie v této soupravě jsou označeny symboly rizika a bezpečnosti dle

Evropské směrnice 1999/45/ES a mělo by se s nimi odpovídajícím způsobem

zacházet. Listy s bezpečnostními údaji o materiálu je možné prohlížet na stránce

www.hologic.com a jsou k dispozici na vyžádání.

Test Progensa PCA3 12

501377CS Rev. 003

Požadavky na uchovávání a manipulaci Progensa PCA3

Požadavky na uchovávání a manipulaci

A. Informace o skladování reagencií naleznete v Tabulka 1.

B. Neuchovávejte reagencii zachycení cíle při teplotách pod 15 °C.

C. Reagencie sondy a rekonstituovaná reagencie sondy jsou fotosenzitivní. Chraňte tyto

reagencie před nadměrnou expozicí světlu při uchovávání a přípravě pro použití.

D. Reagencie nezmrazujte.

E. Reagencie ani kapaliny nepoužívejte po uplynutí doby použitelnosti.

F. Kalibrátory a kontroly PCA3 a PSA testu Progensa jsou lahvičky na použití v jednom

cyklu a musí být po použití zlikvidovány.

G. Změny fyzikálního vzhledu dodané reagencie mohou znamenat nestabilitu nebo

narušení těchto materiálů. Pokud jsou změny fyzikálního vzhledu reagencií viditelné po

resuspendaci (např. jasné změny barvy reagencie nebo zakalení znamenající

mikrobiální kontaminaci), kontaktujte před použitím technickou podporu společnosti

Hologic.

H. Rekonstituovanou reagencii vyhoďte po 30 dnech nebo po uplynutí doby použitelnosti,

dle toho, co nastane dříve.

I. Zbylé otevřené nebo rekonstituované reagencie je možné použít v následujících

testech, pokud byly uchovávány správně po úvodním použití. Zbylá reagencie může

být smíchána s čerstvě připravenou nebo jinou zbylou reagencií stejné šarže.

Nezaměňujte, nemíchejte ani nekombinujte reagencie ze souprav s různými čísly

šarží (viz Varování a bezpečnostní opatření). Žádné součásti smíchaných reagencií

nesmí překračovat skladovací meze otevřených nebo rekonstituovaných reagencií.

Ujistěte se, že byla smíchaná reagencie důkladně promíchána a že byl připraven

dostatečný objem reagencie pro celý cyklus testu.

Tabulka 1: Skladování reagencií

Reagencie / kapalina Skladování v neotevřeném stavu Stabilita po otevření/rekonstituci

(do uplynutí doby použitelnosti)

Amplifikační reagencie 2 °C až 8 °C do uplynutí doby použitelnosti 30 dnů při teplotě 2 °C až 8 °C*

Reagencie sondy 2 °C až 8 °C do uplynutí doby použitelnosti 30 dnů při teplotě 2 °C až 8 °C*

Enzymatická reagencie 2 °C až 8 °C do uplynutí doby použitelnosti 30 dnů při teplotě 2 °C až 8 °C*

Reagencie zachycení cíle 15 °C až 30 °C do uplynutí doby použitelnosti 30 dnů při teplotě 15 °C až 30 °C

Amplifikačně rekonstituční

roztok 2 °C až 30 °C do uplynutí doby použitelnosti Neuplatňuje se (jedno použití)

Rekonstituční roztok sondy 2 °C až 30 °C do uplynutí doby použitelnosti Neuplatňuje se (jedno použití)

Enzymatický rekonstituční

roztok 2 °C až 30 °C do uplynutí doby použitelnosti Neuplatňuje se (jedno použití)

Selekční reagencie 2 °C až 30 °C do uplynutí doby použitelnosti 30 dnů při teplotě 15 °C až 30 °C

Kalibrátory 2 °C až 8 °C do uplynutí doby použitelnosti Neuplatňuje se (jeden cyklus testu)

Kontroly 2 °C až 8 °C do uplynutí doby použitelnosti Neuplatňuje se (jeden cyklus testu)

Olejová reagencie 15 °C až 30 °C do uplynutí doby použitelnosti 30 dnů při teplotě 15 °C až 30 °C

Promývací roztok 15 °C až 30 °C do uplynutí doby použitelnosti 30 dnů při teplotě 15 °C až 30 °C

Pufr pro deaktivační kapalinu 15 °C až 30 °C do uplynutí doby použitelnosti 28 dnů při teplotě 15 °C až 30 °C

* Může se používat znovu pro další cykly až čtyřikrát, za předpokladu, že celkový čas při pokojové teplotě není delší než

24 hodiny.

Progensa PCA3 Sběr, transport a uchovávání vzorku

Test Progensa PCA3 13

501377CS Rev. 003

Sběr, transport a uchovávání vzorku

Test Progensa PCA3 je navržen pro kvantifikaci PCA3 RNA a PSA RNA v první porci moči

odebrané po vyšetření per rectum, které zahrnuje tři zmáčknutí každého laloku prostaty.

Moč je zpracována pomocí soupravy na přepravu vzorků moči Progensa PCA3. Stabilita

PCA3 RNA a PSA RNA v čerstvé a zpracované moči byla stanovena monitorováním hladin

RNA kopií ve vzorcích moči odebraných dle pokynů uvedených níže.

A. Pokyny pro sběr a zpracování vzorků moči:

1. Chcete-li zajistit odběr dostatečného množství moči, může pomoci, když pacient

vypije větší množství vody (asi 500 ml).

2. Těsně před odběrem moči proveďte vyšetření per rectum dle níže uvedeného popisu:

Aplikujte na prostatu dostatečný tlak, abyste zamáčkli povrch asi o 1 cm a to proveďte

u každého laloku od báze k apexu a ze strany do středu tak, jak ukazuje Obrázek 1.

Na každý lalok zatlačte přesně třikrát. Účelem není provedení masáže prostaty.

Obrázek 1. Správný směr aplikace tlaku na prostatu

3. Po vyšetření per rectum řekněte pacientovi, aby odebral první porci moči (asi 20

až 30 ml na začátku proudu moči) do vhodným způsobem označeného kelímku na

sběr moči. Toto musí být první vzorek moči, kterou pacient vymočí po vyšetření per

rectum. Používejte odběrový kelímek bez jakýchkoliv konzervačních látek. Pokud

pacient není schopen zastavit proud moči a vymočí více, než požadovaných 20 až

30 ml, uschovejte celý tento objem. Pokud není pacient schopen dodat

požadovaný objem moči, je k provedení testu Progensa PCA3 nutných alespoň 2,5

ml moči. Jinak musí být vzorky odmítnuty.

Poznámka: Velmi vysoké objemy moči mohou snížit koncentrace analytů PCA3

and PSA a zřídka mohou vést k neplatnosti vzorku. Proto by se měl pacient

pokusit, aby kelímek na sběr moči nenaplnil.

4. Pokud nejsou nezpracované vzorky moči okamžitě zpracovány, je třeba je

uchovat při teplotě 2 °C až 8 °C nebo na ledu. Zchlazený a nezpracovaný

vzorek moči je třeba přenést do přepravní zkumavky pro vzorek moči do čtyř

hodin od odběru. Jinak musí být vzorek odmítnut a odebrán nový vzorek.

Nezpracované vzorky moči nezmrazujte.

5. Chcete-li zpracovat vzorky moči, těsně uzavřete a pětkrát převraťte vzorek moči,

aby došlo k resuspendaci buněk. Sejměte uzávěr přepravní zkumavky pro vzorek

moči a přeneste 2,5 ml odebrané moči do zkumavky pomocí dodávané

jednorázové přepravní pipety. Jakmile je hladina tekutiny mezi černými plnicími

linkami na štítku přepravní zkumavky pro vzorek moči, znamená to, že byl přidán

správný objem moči.

6. Zkumavku na přepravu vzorku moči znovu pevně uzavřete a pětkrát ji převraťte,

aby se vzorek promíchal. Nyní je vzorek moči považován za zpracovaný.

Left Lobe

Right Lobe

Apex

Base

Levý lalok Pravý lalok

Báze

Apex

Test Progensa PCA3 14

501377CS Rev. 003

Sběr, transport a uchovávání vzorku Progensa PCA3

B. Přeprava a uchovávání vzorku před testováním:

1. Zpracované vzorky moči se musí přepravovat do laboratoře v přepravní zkumavce

pro vzorek moči. Mohou být přepravovány při teplotě okolního prostředí (bez řízené

teploty) nebo zmrazené. Přepravu zásilky je třeba domluvit předem, aby bylo

zajištěno, že budou vzorky moči obdrženy testovacím centrem do 5 dnů od odběru.

Po přijetí zásilky musí laboratoř ověřit datum odběru vzorku na zkumavce. Pokud byly

vzorky zaslány při teplotě okolního prostředí a jsou obdrženy více než 5 dnů po

odběru vzorku, vzorek musí být odmítnut a musí být vyžádán nový vzorek. Laboratoř

může uchovávat vzorky při teplotě 2 °C až 8 °C po dobu až 14 dnů předtím, než

bude nutná jejich likvidace. Pokud potřebujete delší období, viz Tabulka 2, kde jsou

uvedeny povolené doby skladování při různých teplotách.

Tabulka 2: Délka uchovávání zpracovaných vzorků moči

2. Zpracované vzorky moči mohou podstoupit až pět cyklů zmrazení a rozmrazení.

C. Uchovávání vzorků po testování:

1. Vzorky musí být po provedení testu uloženy vertikálně ve stojanu.

2. Přepravní zkumavky na vzorky moči by měly být zakryty novou čistou plastovou nebo

foliovou bariérou, pokud nejsou znovu zakryty neporušenou krytkou.

3. Pokud je třeba testované vzorky zmrazit nebo přepravit, odstraňte propichovací

uzávěr a na transportní zkumavky na vzorky moči umístěte nový nepropichovací

uzávěr. Pokud je třeba vzorky odeslat pro testování do jiného zařízení, je nutno

dodržovat doporučené teploty. Zabraňte rozstřikování a zkřížené kontaminaci.

Poznámka: Vzorky se musí přepravovat v souladu s příslušnými státními

a mezinárodními přepravními předpisy.

Teplota uchovávání Doba

Uchovávání a přeprava zpracovaných vzorků: až 5 dnů*

Po obdržení v testovacím centru:

2 °C až 8 °C až 14 dnů

−35 °C až −15 °C až 11 měsíců**

při teplotě −65 °C nebo nižší až 36 měsíců**

*Čas povolený pro přepravu při teplotě okolního prostředí nebo ve zmrazeném stavu.

**Čas povolený po skladování v chladničce.

Progensa PCA3 Postup testu

Test Progensa PCA3 15

501377CS Rev. 003

Postup testu

A. Příprava pracovního místa

1. Nastavte jednu vodní lázeň na 62 °C ± 1 °C pro preamplifikaci, druhou vodní lázeň

na 42 °C ± 1 °C pro amplifikaci a třetí vodní lázeň na 62 °C ± 1 °C pro poamplifikaci.

Ujistěte se, že vodní lázně obsahují dostatek vody (viz Poznámky k postupu). Pokud

používáte lázeň/vířivku se suchým teplem SB100, přečtěte si aplikační list lázně/

vířivky se suchým teplem SB100 pro test Progensa PCA3 (aplikační list SB100).

2. Před zahájením testu otřete pracovní povrchy a pipetory 2,5% až 3,5% (0,35 M až

0,5 M) roztokem chlornanu sodného. Roztok chlornanu sodného nechte v kontaktu

s povrchy a pipetory po dobu minimálně 1 minuty a pak opláchněte vodou. Roztok

chlornanu sodného nenechte zaschnout. Zakryjte pracovní plochu, na níž bude

reakce provedena, čistým absorpčním laboratorním krytem na pracovní desky, který

je potažen z jedné strany plastem.

3. Umístěte dostatečný počet kazet s deseti špičkami do systému pro zachycení cíle

(TCS). Ujistěte se, že je promývací láhev TCS naplněna promývacím roztokem a že

je aspirátor připojen k vakuovému čerpadlu. (Viz provozní příručka systému zachycení

cíle (Target Capture System Operator’s Manual).)

B. Rekonstituce a příprava reagencie

Rekonstituce reagencie by měla být provedena před zahájením přenosu vzorku.

1. Chcete-li rekonstituovat amplifikační reagencie, enzymatické reagencie a reagencie

sondy, zkombinujte láhve lyofilizované reagencie s rekonstitučním roztokem.

Vpřípadě uložení v chladničce nechejte rekonstituční roztoky před použitím

dosáhnout pokojové teploty.

Obrázek 2. Rekonstituční proces

a. Spárujte odpovídající rekonstituční roztok s jeho suchou reagencií. Ověřte si, že

mají lahvičky štítky shodné barvy, aby bylo zajištěno správné spárování.

b. Otevřete lahvičku se suchou reagencií a pevně zasuňte konec rekonstituční

objímky s drážkou do otvoru v lahvičce (Obrázek 2, krok 1).

c. Otevřete odpovídající rekonstituční roztok a umístěte uzávěr na čistý zakrytý

pracovní povrch. Držte láhev s roztokem na pracovní desce a pevně zasuňte

druhý konec rekonstituční objímky do otvoru v láhvi (Obrázek 2, krok 2).

d. Sestavené lahve pomalu převraťte. Nechte roztok vytéct z láhve do skleněné

lahvičky (Obrázek 2, krok 3). Vyčkejte, až se lyofilizovaná reagencie rozpustí

Test Progensa PCA3 16

501377CS Rev. 003

Postup testu Progensa PCA3

a pak roztokem jemně ve skleněné lahvičce míchejte, aby se promíchal. Při

kroužení láhví zamezte vzniku pěny (Obrázek 2, krok 4).

e. Obraťte sestavu a skloňte v úhlu 45°, abyste minimalizovali vznik pěny

(Obrázek 2, krok 5). Nechte veškerou kapalinu natéct zpět do plastové lahve.

f. Sejměte rekonstituční objímku a skleněnou lahvičku (Obrázek 2, krok 6).

g. Znovu uzavřete plastovou lahev (Obrázek 2, krok 7). Na všech lahvičkách

s rekonstutituovanými reagenciemi zaznamenejte iniciály obsluhy a datum

rekonstituce. Ujistěte se, že na lahvičky reagencie sondy zaznamenáte analyt

(PCA3 nebo PSA).

h. Rekonstituční objímku a skleněnou lahvičku zlikvidujte (Obrázek 2, krok 8).

2. Dříve rekonstituované reagencie sondy, amplifikační a enzymatické reagencie musí

před zahájením testu dosáhnout pokojovou teplotu (15 °C až 30 °C). Přečtěte si

Požadavky na uchovávání a manipulaci, pokud smícháváte zbytky reagencií

dohromady. Pokud rekonstituovaná amplifikační reagencie obsahuje precipitát, který

se při pokojové teplotě nerozpouští, zahřívejte ji v preamplifikační oblasti při teplotě

62 °C ± 1 °C po dobu 1 až 2 minut. Pokud rekonstituovaná reagencie sondy

obsahuje precipitát, který se při pokojové teplotě nevrací do roztoku, zahřívejte ho v

poamplifikační oblasti při teplotě 62 °C ± 1 °C po dobu 1 až 2 minut. Po těchto

zahřívacích krocích mohou být rekonstituované reagencie použity dokonce i

vpřípadě, že zůstává reziduální precipitát. Po resuspendaci promíchejte lahvičky

jemným převracením.

C. Příprava stojanu

Opakovací pipetor používaný pro zachycení cíle, přenos vzorků a amplifikaci musí být

vyhrazen pro použití pouze v těchto krocích (viz Varování a bezpečnostní opatření).

1. Nastavte jeden stojan pro analyt PCA3 a další stojan pro analyt PSA.

Poznámka: Pokud je počet vzorků dostatečně nízký, oba analyty je možné testovat v

jednom stojanu. Pokud používáte přístroj TECAN Freedom EVO 100/4, musí být pro

každý analyt vyhrazeny samostatné stojany. Je možné testovat maximálně dva plné

stojany (20 TTU) najednou.

2. Do stojanu(ů) na jednotku deseti zkumavek (TTU) umístěte dostatek jednotek TTU

pro kalibrátory, kontroly a vzorky pro každý analyt.

3. Označte TTU pomocí identifikačního čísla vzorku. Tabulka 3 popisuje způsob přidání

kalibrátorů, kontrol a vzorků. Spusťte PSA kalibrátory na nové TTU.

Poznámka: Kalibrátory by měly být testovány ve třech replikátech a kontroly ve dvou

replikátech a musí být testovány ve stejném stojanu jako vzorky. Vzorky je třeba

testovat v duplikátu. Nenechávejte prázdné reakční zkumavky mezi kalibrátory,

kontrolami a vzorky. Pokud používáte přístroj TECAN Freedom EVO 100/4, přečtěte

si aplikační list k přístroji TECAN Freedom EVO 100/4 pro test Progensa PCA3

(aplikační list TECAN Freedom EVO), kde jsou uvedeny další pokyny.

Progensa PCA3 Postup testu

Test Progensa PCA3 17

501377CS Rev. 003

Tabulka 3: Příklad nastavení stojanu

D. Verifikace informací o koncentraci

Ověřte si u administrátora systému softwaru testu Progensa PCA3, že informace

o koncentraci pro šarže souprav kalibrátorů a kontrol testu Progensa PCA3 a PSA byly

zadány. Pro více informací si přečtěte stručnou referenční příručku pro test Progensa

PCA3 (Quick Reference Guide for Progensa PCA3 Assay) nebo příručku systémového

administrátora softwaru testu Progensa PCA3 (Progensa PCA3 Assay Software

System Administrator’s Manual).

Poznámka: Zadání informací o koncentraci je vyžadováno před prvním použitím

každé nové šarže soupravy kalibrátorů a kontrol. Následné cykly využívající kalibrátory

a kontroly ze stejné šarže soupravy nevyžadují další opatření.

E. Nastavení editoru pracovního seznamu

Vytvořte pracovní seznam cyklu pomocí editoru pracovního seznamu Hologic na

počítači, který se nachází v preamplifikační oblasti. Pro použití editoru pracovního

seznamu si přečtěte stručnou referenční příručku (Quick Reference Guide) nebo

provozní příručku editoru pracovního seznamu Hologic (Hologic Worklist Editor

Operator’s Manual). Pokud používáte přístroj TECAN Freedom EVO 100/4, přečtěte si

také aplikační seznam TECAN Freedom EVO, kde jsou uvedeny další pokyny.

F. Příprava vzorku

1. Před testováním ponechte kalibrátory a kontroly dosáhnout pokojovou teplotu.

Promíchejte lahvičky jemným převracením.

2. Před testováním ponechte vzorky dosáhnout pokojovou teplotu. Vzorky

nemíchejte vířením. Vzorky je třeba míchat občasným jemným převracením

během zahřívacího období. Viz Poznámky k postupu, kde jsou uvedeny informace

o precipitátu, který nepřejde do roztoku, a manipulaci se zmrazenými vzorky.

G. Preamplifikace

Preamplifikační prostředí musí mít teplotu 15 °C až 30 °C. Uskutečněte cyklus obou

stojanů paralelně. Pokud používáte lázeň/vířivku se suchým teplem SB100, přečtěte si

aplikační list SB100. Pokud používáte přístroj TECAN Freedom EVO 100/4, přečtěte si

aplikační list TECAN Freedom EVO, kde jsou uvedeny další pokyny.

Poloha

stojanu Popis vzorku

*Koncentrace cíle

PCA3

(kopie/ml)

*Koncentrace

cílového PSA

(kopie/ml)

1 až 3 Kalibrátor 1 0 0

4 až 6 Kalibrátor 2 250 7 500

7 až 9 Kalibrátor 3 2 500 75 000

10 až 12 Kalibrátor 4 25 000 750 000

13 až 15 Kalibrátor 5 125 000 3 000 000

16 až 17 Kontrola A 1 250 37 500

18 až 19 Kontrola B 62 500 1 500 000

20 až n Vzorek neznámé neznámé

*Pozitivní kalibrátory a kontroly PCA3 a PSA jsou přiděleny dle hodnoty, takže aktuální hodnoty

kopií/ml pro kalibrátory 2 až 5 a kontroly A a B budou lehce odlišné než u cílových koncentrací

uvedených v tabulce a budou se lišit mezi jednotlivými šaržemi. Informace o koncentracích jsou

poskytovány na kartě v balení lahviček kalibrátorů a kontrol a jsou použity pro kalibraci a stanovení

validity cyklu.

Test Progensa PCA3 18

501377CS Rev. 003

Postup testu Progensa PCA3

1. Reagencii zachycení cíle (TCR) důkladně promíchejte vířením nebo převracením.

Za použití opakovacího pipetoru přidejte do odpovídající reakční zkumavky 100 µl

TCR specifického pro analyt.

2. Propíchněte uzávěr lahvičky kalibrátoru mikropipetorem a přidejte 400 µl

kalibrátoru k řádně označené reakční zkumavce. Za použití stejné špičky pipety

odeberte přidaný replikát z lahvičky přes propíchnutou krytku. Pro každou lahvičku

kalibrátoru používejte nové pipetové špičky. Opakujte stejný postup pro přidání

kontrol a vzorků. Zakryjte a uchovejte veškerý zbylý vzorek a uložte ho při teplotě

8 °C nebo nižší (viz Sběr, transport a uchovávání vzorku pro více informací) pro

případ, že bude nutné opakování testu.

3. Zakryjte TTU uzavírací kartou(kartami) a stojanem jemně rukou zatřepte.

Neumísťujte do vířivky. Stojan inkubujte při teplotě 62 °C ± 1 °C ve vodní lázni

po dobu 30 ± 5 minut.

4. Vyjměte stojan z vodní lázně a osušte spodní části zkumavek na absorpčním

materiálu.

5. Ujistěte se, že jsou uzavírací karty pevně usazeny. Pokud je to nutné, vyměňte je

za nové uzavírací karty a TTU řádně uzavřete.

6. Stojan míchejte vířením po dobu 60 sekund ve vířivém mixéru pro více zkumavek

(viz Poznámky k postupu). Začněte s vířením do 2 minut od vyjmutí stojanu

z vodní lázně.

7. Neodstraňujte uzavírací karty a stojan inkubujte při pokojové teplotě po dobu

30 ± 5 minut.

8. Umístěte stojan s předním štítkem směrem dopředu na magnetickou bázi TCS na

dobu 5 až 10 minut. Vložte TTC do stojanu.

9. Naplňte hadičky rozdělovací čerpací stanice načerpáním promývacího roztoku přes

rozdělovací potrubí. Načerpejte dostatek kapaliny do systému, aby nebyly

v hadičce přítomné žádné vzduchové bubliny a všech deset trysek dodávalo

stabilní proud kapaliny.

10. Zapněte vakuové čerpadlo a odpojte aspirační potrubí na prvním konektoru mezi

aspiračním potrubím a záchytnou láhví. Zkontrolujte, že měřidlo vakua splňuje

specifikace zkoušky těsnosti. Hodnotu získáte po 15 sekundách. Znovu připojte

potrubí a zajistěte, že měřidlo vakua splňuje specifikace zkoušky těsnosti.

Ponechejte vakuové čerpadlo zapnuté do dokončení všech kroků zachycení cíle

a dokud nebude aspirační potrubí suché.

Viz list specifikací vakua pro systém zachycení cíle na zadní straně provozní

příručky systému zachycení cíle (Target Capture System Operator’s Manual) nebo

se obraťte na technickou podporu společnosti Hologic, chcete-li získat další

informace.

11. Pevně připojte aspirační potrubí k první sadě špiček. Zanořte špičky do první

jednotky TTU, až se dotknou povrchu kapaliny. Při pohybu špiček směrem dolů

udržujte špičky v kontaktu s povrchem kapaliny, až se špičky dostanou do krátkého

kontaktu se dny zkumavek. Jemně poklepejte špičkami o dno zkumavek, až dojde

k odstranění veškeré kapaliny. Neudržujte špičky v kontaktu se dny zkumavek příliš

dlouho a neklepejte špičkami rychle, aby nedošlo v záchytném vakuovém prostoru

k vytvoření nadměrné pěny.

Progensa PCA3 Postup testu

Test Progensa PCA3 19

501377CS Rev. 003

12. Po dokončení aspirace vysuňte špičky do jejich původní kazety. Opakujte aspirační

kroky pro zbývající TTU a přitom používejte vyhraženou špičku pro každou reakční

zkumavku.

13. Umístěte rozdělovací potrubí nad každou TTU a za použití čerpadla rozdělovací

stanice aplikujte 1,0 ml promývacího roztoku do každé zkumavky TTU.

14. Zakryjte zkumavky uzavírací kartou a vyjměte stojan z TCS. Jednou promíchejte

vířením ve vířivém mixéru pro více zkumavek. Další informace viz Poznámky k

postupu.

15. Stojan umístěte na magnetickou bázi TCS na 5 až 10 minut.

16. Aspirujte veškerou kapalinu jako v kroky 11 a krok 12.

17. Po poslední aspiraci vyjměte stojan z báze TCS a vizuálně zkontrolujte zkumavky,

abyste se ujistili, že byla aspirována veškerá kapalina a že všechny zkumavky

obsahují pelety magnetických částic. Pokud je viditelná jakákoliv kapalina, umístěte

stojan zpět na bázi TCS na 2 minuty a opakujte aspiraci pro tuto TTU pomocí

stejných špiček použitých předtím pro každou reakční zkumavku. Pokud bude

JAKÁKOKLIV peleta magnetické částice viditelná po dokončení aspirace,

zkumavku je možné akceptovat. Pokud nebude viditelná žádná peleta, vzorek je

třeba testovat znovu. Pokud při následujícím cyklu stejný vzorek neobsahuje pelety

magnetických částic v tomto kroku, může to znamenat problém se vzorkem.

V takovém případě se doporučuje nový odběr vzorku moči.

H. Amplifikace

Poznámka: Přidání enzymu do reakčního stojanu (kroky 6 a krok 7 níže) musí být

provedeno maximálně do 90 sekund.

Proveďte Kroky 6 a 7 na jednom stojanu předtím, než to budete opakovat na druhém

stojanu. Pokud používáte lázeň/vířivku se suchým teplem SB100, přečtěte si aplikační

list SB100. Pokud používáte přístroj TECAN Freedom EVO 100/4, přečtěte si aplikační

list TECAN Freedom EVO, kde jsou uvedeny další pokyny.

1. Pomocí opakovacího pipetoru přidejte 75 µl rekonstituované amplifikační reagencie

specifické pro analyt do každé reakční zkumavky. Všechny reakční směsi ve

stojanu by měly mít nyní červenou barvu.

2. Pomocí opakovacího pipetoru přidejte 200 µl olejové reagencie.

3. Zakryjte zkumavky uzavírací kartou a míchejte vířením ve vířivém mixéru pro více

zkumavek.

4. Stojan inkubujte v preamplifikační vodní lázni při teplotě 62 °C ± 1 °C po dobu

10 ± 5 minut.

5. Přeneste stojan do vodní lázně o teplotě 42 °C ± 1 °C na 5 ± 2 minuty.

6. Stojan ponechejte ve vodní lázni a opatrně odstraňte uzavírací kartu; za použití

opakovacího pipetoru přidejte 25 µl rekonstituované enzymatické reagencie do

každé reakční směsi. Všechny reakce by měly mít nyní oranžovou barvu.

7. Okamžitě zakryjte všechny zkumavky čerstvou uzavírací kartou, vyjměte je z vodní

lázně a rychle smíchejte jemným třepáním stojanu v ruce.

Poznámka: Minimalizujte čas, kdy je stojan mimo vodní lázeň, abyste předešli

vychladnutí zkumavek.

8. Stojan inkubujte při teplotě 42 °C ± 1 °C po dobu 60 ± 5 minut.

Test Progensa PCA3 20

501377CS Rev. 003

Postup testu Progensa PCA3

I. Po amplifikaci

Opakovací pipetor používaný při hybridizaci a selekci musí být vyhrazený pouze na

tyto kroky (viz Varování a bezpečnostní opatření). Poamplifikační prostředí včetně

detekce musí mít teplotu 15 °C až 30 °C. Pokud používáte lázeň/vířivku se suchým

teplem SB100, přečtěte si aplikační list SB100.

1. Hybridizace

a. Vyjměte stojan z preamplifikační vodní lázně a přeneste ho do poamplifikační

oblasti. Přidejte 100 µl rekonstituované reagencie sondy specifické pro analyt

za použití opakovacího pipetoru. Všechny reakční směsi by měly mít nyní

žlutou barvu.

b. Zakryjte zkumavky uzavírací kartou a míchejte vířením ve vířivém mixéru pro

více zkumavek po dobu 10 sekund, nebo dokud nebude barva uniformní.

c. Inkubujte stojan při teplotě 62 °C ± 1 °C ve vodní lázni po dobu 20 ± 5 minut.

d. Vyjměte stojan z vodní lázně a inkubujte při pokojové teplotě po dobu

5 ± 1 minuta.

2. Výběr

a. Opakovacím pipetorem přidejte 250 µl selekční reagencie do každé zkumavky.

Všechny reakce by měly mít nyní růžovou barvu.

b. Zakryjte zkumavky uzavírací kartou, míchejte vířením po dobu 10 sekund, nebo

dokud nebude barva uniformní a stojan inkubujte ve vodní lázni při teplotě

62 °C ± 1 °C po dobu 10 ± 1 minuta.

c. Vyjměte stojan z vodní lázně. Stojan inkubujte při pokojové teplotě po dobu

15 ± 3 minuty.

J. Detekce

Chcete-li použít luminometr Leader HC+, přečtěte si provozní příručku luminometru

Leader HC+ (Leader HC+ Luminometer Operator’s Manual). Chcete-li použít software

testu Progensa PCA3, přečtěte si stručnou referenční příručku (Quick Reference

Guide) nebo příručku systémového administrátora softwaru testu Progensa PCA3

(Progensa PCA3 Assay Software System Administrator’s Manual) a provozní příručku

testu Progensa PCA3 (Progensa PCA3 Assay Operator's Manual).

1. Připravte luminometr Leader HC+ umístěním jedné prázdné TTU do pozice kazety

číslo 1 a jednou proveďte PROMÝVACÍ protokol.

2. Ujistěte se, že jsou přítomny dostatečné objemy reagencií Auto Detect 1 a Auto

Detect 2 pro dokončení reakcí.

3. Vložte TTU do luminometru dle diagramu v luminometru jako vodítka. Pokud

testujete oba analyty (těsně za sebou), vložte nejprve všechny jednotky TTU pro

PCA3 a těsně za nimi všechny TTU pro PSA.

4. Přihlaste se do počítače. Klikněte na

NEW RUN

(Nový cyklus) a zvolte odpovídající

protokol testu a koncentrace. Klepněte na

(Další) a zahajte cyklus.

Poznámka:

Cyklus musí být dokončen do 2 hodin od konce inkubačního kroku

selekce při teplotě 62 °C.

5. Připravte deaktivační roztok smícháním stejných objemů 5% až 7% (0,7 M až 1,0 M)

roztoku chlornanu sodného a pufru pro deaktivační kapalinu v plastovém kontejneru s

velkým uzávěrem. Plastový kontejner označte štítkem a na štítek napište datum

exspirace. Deaktivační kapalina je stabilní po dobu 4 týdnů při pokojové teplotě.

Stránka sa načítava ...

Hologic Progensa PCA3 Assay Návod na používanie

Značka: Hologic

Model: Progensa PCA3 Assay

Typ: Návod na používanie

Stiahnite si PDF

správa

Hologic Progensa PCA3 Assay Návod na používanie

Hologic Progensa PCA3 Assay Návod na používanie

Súvisiace články

Ďalšie dokumenty