VENTANA MMR RxDx Panel

Interpretačná príručka pre

endometriálny karcinóm

VENTANA anti-MLH1 (M1) Mouse Monoclonal Primary Antibody

VENTANA anti-PMS2 (A16-4) Mouse Monoclonal Primary Antibody

VENTANA anti-MSH2 (G219-1129) Mouse Monoclonal Primary Antibody

VENTANA anti-MSH6 (SP93) Rabbit Monoclonal Primary Antibody

Obsah

Úvod 1

Prípadové kritériá na klinické hodnotenie 5

Skórovací algoritmus 6

Kontroly 8

Interné pozitívne kontroly 8

Pracovný postup týkajúci sa vzoriek 10

Referenčné obrázky 12

Proficientné prípady 12

Deficientné prípady 14

Problematické prípady 18

Vplyv predanalytických podmienok na panel VENTANA MMR RxDx Panel 28

substitúcií báz, ktoré sa spontánne vyskytujú počas replikácie

DNA. Na základe metód založených na polymerázovej reťazovej

reakcii (PCR) sa preukázalo, že zlyhanie MMR často vedie k

mikrosatelitovej nestabilite (MSI), čo je stav, pri ktorom sa do DNA

vkladajú krátke, tandemové repetície. Keď je počet repetícií

rovný alebo väčší ako 30 % vyšetrovaných mikrosatelitových

lokusov, MSI možno ďalej charakterizovať ako MSI vysokého

stupňa, resp. MSI-High (MSI-H). Defekty v MMR mechanizme sa

pripisujú mutáciám v MMR proteínoch, najčastejšie MLH1, PMS2,

MSH2 a MSH6.

čoho je oprava postihnutej DNA excíziou. Výsledkom mutácií

alebo deficitov týchto proteínov je častá MSI a somatická

mutácia v dôsledku replikačnej chyby. Je možné preukázať, že

MMR imunohistochemické (IHC) testovanie môže byť užitočné

pri identifikovaní MMR génov, ktoré pravdepodobne obsahujú

zárodočné alebo somatické alterácie.

Tradične sa liečebné režimy u onkologických pacientov

určujú podľa konkrétnej malignity. Avšak nové imunoterapie,

najmä tie, ktoré modifikujú bunkové dráhy zahŕňajúce proteín

programovanej bunkovej smrti 1 (PD-1) alebo proteín ligandu

expresia PD-L1 na nádorových bunkách (TC) tlmí protinádorovú

imunitu, výsledkom čoho je imunitná evázia. Preto prerušenie

PD-L1/PD-1 dráhy predstavuje atraktívnu stratégiu na opätovné

posilnenie T-bunkovej imunity špecifickej pre nádor.

Mnoho rakovín, ktoré sa často vyskytujú, je deficitných na MMR

(dMMR) a vykazujú MSI. Vo viacerých štúdiách sa preukázalo,

že deficit MMR koreluje s vyššou expresiou proteínov PD-1

alebo PD-L1. Takže MMR proteíny môžu byť užitočné ako

biomarkery pre PD-1 cielenú liečbu. Konkrétne strata expresie

jedného alebo viacerých MMR proteínov môže predpovedať

vyššiu pravdepodobnosť odpovede na takúto liečbu. Inhibítory

PD-1 môžu byť prospešné pri mnohých, často sa vyskytujúcich

rakovinách s vysokou frekvenciou deficitu MMR a/alebo MSI-H,

a to bez ohľadu na tkanivo, z ktorého rakovina vznikla. Preto

budú mať pacienti, ktorí zvažujú PD-1 cielenú liečbu, úžitok zo

12

12

sa predpokladá, že MSI EC môže mať vyššiu expresiu proteínu

PD-L1 v porovnaní s mikrosatelitne stabilným (MSS) EC.

Hoci sa

liečba EC líši v závislosti od stupňa, histológie a štádia ochorenia,

hodnotenie stavu MMR nádorov EC môže pomôcť pri prognóze

a vedení liečby

cielenú liečbu, úžitok zo sprievodného diagnostického testu na

Strata expresie ktoréhokoľvek z MMR proteínov vrátane MLH1,

PMS2, MSH2 alebo MSH6 má za následok deficit MMR.

Prítomnosť sfarbenia pre všetky štyri markery proteínov MMR v

súvisiacich indikácií sú uvedené v príbalovom letáku príslušného

VENTANA MMR RxDx Panel.

Účel interpretačnej príručky

Táto príručka slúži na:

• Poskytnutie nástroja patológom na uľahčenie klinického

• Poskytnutie fotografií na znázornenie vzorov sfarbenia, ktoré

MMR intaktný a stratový stav farbenia: V týchto prípadoch endometriálneho karcinómu vykazujú jadrá jednoznačné sfarbenie,

ktoré je dominantným vzorom farbenia pozorovaným vo väčšine nádorových tkanív pri MSH6 intaktnom stave (ľavý panel).

Neprítomnosť žiadneho nukleárneho sfarbenia v nádorových tkanivách predstavuje MSH6 stratový stav (pravý panel). Jednoznačné

nukleárlne sfarbenie v interných kontrolných bunkách (t. j. lymfocytoch) v blízkosti životaschopných nádorov slúži ako akceptovateľná

interná pozitívna kontrola.

Charakteristiky farbenia

Bunky označené s každým testom v paneli VENTANA MMR RxDx

Panel sa hodnotia z hľadiska prítomnosti alebo neprítomnosti

signálu diaminobenzidínu (DAB). Farbenie VENTANA MMR

• Stratový stav je charakterizovaný neprítomnosťou

Signál môže byť distribuovaný homogénne s jednotnou

úrovňou intenzity v rámci celej neoplastickej časti nádora alebo

heterogénne s viac ako jednou úrovňou intenzity. Možno ho ľahko

sa používa na hodnotenie prítomnosti pozadia v testovaných

č. 1 sú uvedené kritériá prijateľnosti morfológie a pozadia. V

tabuľke č. 2 sú uvedené prípadové kritériá na hodnotenie stavu

MMR neoplastického tkaniva s ktorýmkoľvek zo štyroch testov v

paneli VENTANA MMR RxDx Panel.

Kritériá prijateľnosti morfológie a pozadia

VENTANA MMR RxDx Panel.

Kritériá Prijateľné Neprijateľné

sú vizualizované, čo umožňuje klinickú

interpretáciu špecifického farbenia

Bunkové prvky, ktoré sú predmetom záujmu, nie sú

vizualizované, čo obmedzuje klinickú interpretáciu

špecifického farbenia

interpretáciou špecifického farbenia

Pozadie interferuje s možnosťou interpretácie

špecifického farbenia

Tabuľka č. 1: Kritériá prijateľnosti morfológie a pozadia

Klinická interpretácia Kritéria vzoru sfarbenia

Hodnotiteľné (všetko musí byť pravda)

kritérií uvedených v tejto časti, farbenie na

sklíčku sa musí zopakovať alebo sa podľa

potreby prípad zamietne)

2. Sklíčko Negative Reagent Control je neprijateľné

3. Morfológia je neprijateľná

4. Pozadie je neprijateľné

5. Interné pozitívne kontroly nemajú jednoznačné nukleárne sfarbenie

6. Interpretácia nie je možná kvôli strate tkaniva, absencii nádoru,

artefaktom a/alebo okrajovým artefaktom

Proficientný prípad 2: MLH1, PMS2, MSH2 a MSH6 intaktný stav pri endometriálnom karcinóme vykazujúcom intenzívne

nukleárne sfarbenie v nádorových bunkách v prítomnosti náležite sfarbených interných kontrol. Prijateľnými Negative Reagent Controls

sú myšia NRC (mNRC) a králičia NRC (rNRC).

H&E 20x

MLH1 20x PMS2 20x

Deficientný prípad 1: MLH1 a PMS2 stratový stav pri endometriálnom karcinóme bez nukleárneho sfarbenia v nádorových

bunkách v prítomnosti náležite sfarbených interných kontrol. MSH2 a MSH6 vykazujú intaktný stav. Cytoplazmatické zafarbenie sa

pri interpretácii stavu neberie do úvahy. Prijateľnými Negative Reagent Controls sú myšia NRC (mNRC) a králičia NRC (rNRC).

Deficientné prípady

H&E 20x

Deficientný prípad 2: MLH1 a PMS2 stratový stav pri endometriálnom karcinóme bez nukleárneho sfarbenia v nádorových

H&E 20x

MLH1 20x PMS2 20x

H&E 20x